Antaŭzorgoj por poliakrilamida ĝela elektroforezo

· poliakrilamidoĝelo devas per acrilamida monomero, polimerigo komenca materialo, katalizilo, kaj la rajto de salo kaj bufro miksaĵo kune.

· akrilamidokaj BIS (N, N '- metileno duobla akrilamido) estas la monomera formo ĝela matrico.

· amonia persulfato komenci adhesive polimerigo procezo. La formuliĝo de la gluo postulas 10%-amonian persulfatan solvon preparitan en akvo. Plej multaj informoj indikis bezonon de aktiva uzo. Tamen, la 10% solvo povas esti metita je 4℃ dum pluraj semajnoj sen grava perdo de aktiveco. Faru ĝis 10 ml kaj forĵetu kiam la gluo ne amasiĝas.

Konsilo: La procento deakrilamidoen sinsekvo gluo kaj proteingluo ne estas la sama. Se vi uzas prefaritan akrilamidon: BIS-solvon, certigu ricevi la ĝustan botelon.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetrametiletilendiamino) estas katalizilo, en bruna botelo, metita en la fridujon. Aldonu ĝuste antaŭ verŝi gluon.

· Poliakrilamida elektroforezo uzata vitro en elektroforezo devas esti lavita antaŭ kaj post ĉiufoje. Post elektroforezo, lavu per mola peniko kaj tuko en varma sapakvo, lavu per distilita akvo kaj staru por sekiĝi.

· humideco kaj polvo povas kaŭzi kun kava polimero. Antaŭ elektroforezo, purigu la vitran platon per vitra purigilo kaj viŝu ĝin per mola broso. Lavu per distilita akvo kaj sekigu plene per papera viŝtuko. Rinvado per 70% etanolo antaŭ viŝi per papero helpas purigi kaj akceli sekiĝon. Aldonu specimenojn de akrilamido sinsekve: BIS, akvo, bufrosolvo, amonia persulfato, TEMED. Tremu bone kaj verŝu tuj.

Ne necesas sengasigi poliakrilamidon antaŭ polimerigo. (Akrilamido kutimis esti metita en vakuon por forigi vezikojn ĉar oksigeno malhelpas polimerigon.)

Horizontala glupunkto specimenaj konsiletoj.

· metu pecon da nigra papero en la malsupran skatolon, nigran fonon por fari iun specimenan truon por vidi pli klare.
· gluo tanko plenigita bufro, ĝuste super la koloido.
· se la rando havas lumon, ŝaltu la lumojn, lasu lumon brilas koloida. Tiru la specimenon en la pipeton.
· uzante aŭtomatan pipet-aparaton.
· en 10-200 mu 1 likva movanta punkto povas esti uzata en la plej multaj el la punktoj sur la specimeno. Por tre malgrandaj specimenaj truoj (malpli ol 10μ1), la longa pipetkapo uzata por sinsekva gluo estas pli oportuna.

· pipetado ĵus mergita en la specimeno, enspirante malrapide moviĝantan fluidon. La provaĵo povas prezentiĝi glueca kun glicerino, kaj rapida pumpado povas tiri aervezikojn en la pipetkapon.

· specimenoj post inhalado pipeta kapo, movos fluida kapo milde sur la rando de la pipo aŭ viŝanta papero suĉas likva kapo ekstere de la gutetoj. Atentu ne suĉi la specimenon.

Metu la specimenon en la specimenan truon

· pipeta aparato por teni iom da premo, fari la specimenojn iomete movi superflua likva kapo.
· la pipeta kapo enmetita en la bufron, iomete pli alta ol la makultruoj, subtenu pozitivan premon. La pinto de la pipeto povas esti enmetita en malgrandan truon.
· malrapide kaj konstante la specimenoj eliras. La pipetpinto estas metita super la punkta specimentruo, kaj la specimeno sinkos en la truon. Lasu la specimenon sinki por plenigi la specimenan truon anstataŭ enpuŝi.
· unufoje la lasta guto de specimeno kun likva kapo, likvaĵo moviĝos al la dua etapo, malrapide levu la likvan movon, moviĝos el bufro.

Kiel fari vertikalan gluan specimenon?

· vertikalaj glupunktoj specimenaj truoj formitaj inter du vitropecoj. En tre maldika gluo, la pipetkapo eĉ ne povas esti enmetita inter du vitraj platoj. Rigardu la glicerinon! Metu la pipetkapon super la specimenan truon kaj la specimeno enprofundiĝos en la truon.
· punkto specimeno antaŭe, nepre meti la vertikala punkto de polipropileno acil ĝelo specimeno truo estas rinseed pura. Forlavu la nepolimeritan akrilamidon kaj la akvon, kiu povas aperi ĉe la fundo de la specimena truo. La akvo povas fari la specimenan truon signife pli malgranda. Uzu 25ml aŭ 50ml injektilon kaj 18-kalibra nadlo. Verŝu la elektroforezan bufron kaj zorge lavu la specimenan truon.
· povas esti malfacile vidi la specimenan truon, sed samtempe la resto estas facila. Se estas troaj truoj, la specimena bufro povas esti provita kun bromofenola bluo.