Antaŭzorgoj por poliakrilamida ĝelelektroforezo

· poliakrilamidoĝelo devas esti farita per akrilamida monomero, polimeriga startmaterialo, katalizilo, kaj la ĝusta kombinaĵo de salo kaj bufro.

· akrilamidokaj BIS (N, N'-metilena duobla akrilamido) estas la monomera formo de ĝelmatrico.

· amonia persulfato komencas la procezon de polimerigo de gluaĵo. La formulo de la gluo postulas 10%-an solvaĵon de amonia persulfato preparitan en akvo. Plej multaj informoj indikis bezonon por aktiva uzo. Tamen, la 10%-a solvaĵo povas esti metita je 4℃ dum pluraj semajnoj sen signifa perdo de aktiveco. Aldonu ĝis 10 ml kaj forĵetu kiam la gluo ne plu agregiĝas.

Konsilo: La procento deakrilamidoen sekvenca gluo kaj proteina gluo ne estas la sama. Se vi uzas pretan akrilamido: BIS-solvaĵon, certigu, ke vi ricevas la ĝustan botelon.

· TEMED (N, N, N', N'-tetrametila etilendiamino) estas katalizilo, en bruna botelo, metata en la fridujon. Aldonu ĝin tuj antaŭ verŝado de gluo.

· Vitro uzata en elektroforezo de poliakrilamida vitro estu lavita antaŭ kaj post ĉiu fojo. Post elektroforezo, lavu per mola broso kaj tuko en varma sapa akvo, lavu per distilita akvo kaj lasu sekiĝi.

· Humideco kaj polvo povas kaŭzi kavan polimeron. Antaŭ elektroforezo, purigu la vitran platon per vitropurigilo kaj viŝu ĝin per mola broso. Lavu per distilita akvo kaj sekigu ĝin plene per papera viŝtuko. Lavado per 70% etanolo antaŭ viŝado per papero helpas purigi kaj akceli la sekigadon. Aldonu specimenojn de akrilamido sinsekve: BIS, akvo, bufrosolvaĵo, amonia persulfato, TEMED. Bone skuu kaj tuj verŝu.

Ne necesas sengasigi poliakrilamidon antaŭ polimerigo. (Akrilamido kutimis esti metita en vakuon por forigi vezikojn ĉar oksigeno malhelpas polimerigon.)

Horizontalaj gluopunktoj specimenaj pintoj.

· metu pecon da nigra papero en la malsupran skatolon, nigra fono por fari iun provaĵan truon por vidi pli klare.
· gluujo plenigita bufro, ĝuste super la koloido.
· se la rando havas lumon, ŝaltu la lumojn, lasu la koloidon brili. Tiru la specimenon en la pipeton.
· uzante aŭtomatan pipetadon.
· ĉe 10-200 mu, 1 likva movanta punkto povas esti uzata en la plej multaj punktoj sur la specimeno. Por tre malgrandaj specimenaj truoj (malpli ol 10μ1), la longa pipeta kapo uzata por sekvenca gluo estas pli oportuna.

· pipetado ĵus mergita en la specimenon, enspirante malrapide moviĝantan fluidon. La specimeno povas aspekti glueca pro glicerino, kaj rapida pumpado povas altiri aervezikojn en la pipetkapon.

· specimenojn post enspirado de la pipeta kapo, la fluida kapo milde movos sur la rando de la tubo aŭ viŝante paperon, la likva kapo suĉos eksteren de la gutetoj. Atentu ne suĉi la specimenon.

Metu la specimenon en la specimenan truon

· pipeta aparato por teni iom da premo, igi la specimenojn iomete movi la superfluan likvan kapon.
· la pipeta kapo enigita en la bufron, iomete pli alte ol la punktaj truoj, konservas pozitivan premon. La pinto de la pipeto povas esti enigita en malgrandan truon.
· malrapide kaj konstante elprenu la specimenojn. La pipeta pinto estas metita super la specimentruo, kaj la specimeno sinkos en la truon. Lasu la specimenon sinki por plenigi la specimentruon anstataŭ premi ĝin enen.
· post la lasta guto de specimeno kun likva kapo, la likvaĵo moviĝos al la dua kruro, malrapide levu la likvaĵon, moviĝu el la bufro

Kiel fari vertikalan gluospecimenigon?

· vertikalaj glupunktoj por specimenaj truoj formitaj inter du pecoj de vitro. En tre maldika gluo, la pipetkapo eĉ ne povas esti enigita inter du vitrajn platojn. Atentu la glicerinon! Metu la pipetkapon super la specimenan truon kaj la specimeno sinkos en la truon.
· Antaŭ la specimeno, certigu, ke la truo de la specimeno estas vertikale ellavita. Forlavu la nepolimerigitan akrilamido kaj la akvon, kiu povas aperi ĉe la fundo de la specimena truo. La akvo povas signife malgrandigi la specimenan truon. Uzu 25ml aŭ 50ml injektilon kaj 18-mezurilan pinglon. Verŝu la elektroforezan bufron kaj zorge lavu la specimenan truon.
· povas esti malfacile vidi la specimenan truon, sed samtempe la resto estas facila. Se estas troaj truoj, la specimenan bufron oni povas testi per bromofenola bluo.